CTAB
法提取
DNA
的原理及步骤:
冷冻的植物组织,在低温干燥状态下机械磨碎。通常精提
DNA
,
都要加液氮使材料变脆,易于研磨。低温降低了
DNase
的活性,利
用
CTAB
(十六烷基三甲基溴化铵)
去污剂溶解细胞膜,
使核蛋白等
解聚,使
DNA
游离出来。
CTAB
作为一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,与核酸形成
复合物,可使核酸沉淀出来。通过离心将
CTAB-
核酸复合物语糖类、
蛋白质等分离开来。
随后将复合物溶于高盐溶液中,
再加乙醇使核酸
沉淀,而
CTAB
溶于乙醇,从而去除
CTAB
。
1.
研磨
2.
加
1000ul
预处理液,
10-15min
,
4000r
,
10min,
弃上清(重复)
预处理液:
Tris-hcl (PH8.0)
提供缓冲环境,
防止核酸被破坏。
EDTA
(螯合二价阳离子)
0.5M
抑制