作业要求
我们统一选择p<0.05而且abs(log2FC)大于1的基因为显著差异表达基因集,对这个基因集用R包做KEGG/GO超几何分布检验分析。
然后把表达矩阵和分组信息分别作出cls和gct文件,导入到GSEA软件分析。
来源于生信技能树:http://www.biotrainee.com/forum.php?mod=viewthread&tid=1750#lastpost
实验过程
1.差异基因筛选
我在转录组入门(7):差异基因分析已经完成了差异基因筛选,为了更好的衔接,我将上一步的代码也一并写入,完整流畅一些,最后我们得到的是数据diff_gene_deseq2,包含了差异表达基因。(这里就不在详细注释这些代码,请看上一篇文章)
require(DESeq2)
control1
control2
rep1
rep2
raw_count
raw_count_filt
raw_count_filter
ENSEMBL
row.names(raw_count_filter)
raw_count_filter
condition
countData
colData
dds
head(dds)
dds2
resultsNames(dds2)
res
summary(res)
table(res$padj<0.05)
res
diff_gene_deseq2 1 | log2FoldChange < -1))
2.GO/KEGG分析及GSEA
我们主要用到的就是Y叔的R包:clusterProfiler包,github上有详细的说明,这个包的功能很强大,我小白一个真的是整不明白,大致看了一些,不过还是有学习到很多,下面就开始贴代码。
2.1 安装clusterProfiler
安装clusterProfiler以及依赖的包,因为个人的电脑都是有差别的,所以我也不好说,这样的代码就一定适合你,因为在我参考别人的时候,就是出现了很多问题,没法安装和载入这个包。具体问题还是要具体分析,也不要那么容易放弃,稍微折腾一些,说不定就能解决。
# Bioconductor的包,安装都是一个套路,source一下,bioLite一下,就差不多了。
source("https://bioconductor.org/biocLite.R")
biocLite("clusterProfiler")
library(clusterProfiler)
# DOSE和DO.db这两个包在我安装的时候提示需要安装,才能载入clusterProfiler,所以就直接安装。
# 问题是在我安装的过程中,又提示好多依赖包没法安装,出现了权限的问题,说是目录NOT PERMISSION。
# 所以一气之下,我就直接修改了R包的读写权限,因为个人电脑&#x