基因引物序列的查找

以SRP72为例。

第一步，先在NCBI官网National Center for Biotechnology Information的“Gene”里检索这个基因，记住其基因ID：

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第二步，进入primerBank官网PrimerBank里找对应引物，Search by选择NCBI Gene ID，Species选对应物种，For tex写基因ID：

点击Submit，出现对应的引物序列：

第三步，验证引物。利用NCBI官网中的primer-blastPrimer designing tool，点击NCBI首页右边的Blast链接，进去后页面往下拉，可以看到：

点击进去，在Primer Parameters里将primerbank里检索到的引物序列粘贴上去。

更改Organism为对应物种

勾选show results in a new window，这是结果在新页面展示的意思，最后点击Get Primers。

稍等片刻，出现结果如下：

在结果中查看名称和碱基配对情况：

        显示“.”为匹配；显示字母为不匹配，不匹配的多于5到6个说明引物不太合适。

        引物length一般在15-30bp，常用的为18-27bp，但不应大于38bp。

        Tm值范围为55-65°C，上下游引物Tm值不宜相差太大，最好不要超过5度。

        GC%一般为40%-60%，以45-55%为宜。上下游不要相差太大。

        product length一般在300-500之间比较好，可扩大范围至60-500之间。