Microbiome | 西北农林姚义清组揭示温驱生物质产氢机制-CSDN博客

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恒温与梯度加热厌氧消化中较高产氢的微生物机制

Article，2024-08-14，Microbiome，[IF 13.8]

DOI：https://doi.org/10.1186/s40168-024-01908-8

原文链接：

https://microbiomejournal.biomedcentral.com/articles/10.1186/s40168-024-01908-8

第一作者：Heng Wu（吴恒）

通讯作者：Yiqing Yao（姚义清）

主要单位：

西北农林科技大学

- 摘要 -

从丰富的木质纤维素中生产的清洁能源氢气（H₂）是化石能源的替代品。然而，作为重要影响因素，温控策略恒温（35、55和65°C）和梯度加热温度（35至65°C）调节H₂积累效果差异及微生物机制尚不清晰。研究表明，恒定65°C导致木质素残留最低（1.93%），纤维素和半纤维素释放最大，H₂产量最高（26.01 mL/g VS），高于35和55°C下的H₂产量。为进一步验证超高温（65°C）的潜力，通过梯度加热条件（35-65°C）进行HS-AD。然而，与恒定的65°C相比，梯度加热条件导致更高的木质素残留量（2.49%）和更低的H₂产量（13.53 mL/g VS）。此外，宏基因组分析显示，纤维素/半纤维素水解细菌和基因（Thermoclostridium，以及xynA、xynB、abfA、bglB和xynD）、产H₂细菌和相关基因（Thermoclostridium，以及nifD、nifH和nifK）以及微生物运动和代谢功能在65°C时得到富集。然而，在梯度加热条件下，双组分系统降低温度选择压力，富集H₂消耗细菌和基因（Acetivibrio，以及hyaB和hyaA），导致H₂产量降低。木质素降解过程并不直接决定H₂的积累，实际上是由影响产H₂/耗H₂基因调节的。此外，温度通过促进微生物物质转移和代谢来增强木质素的水解过程，而不是木质素降解酶、细菌和基因。

- 引言 -

氢能是一种二次清洁能源，被誉为21世纪终极能源，也是在碳达峰、碳中和的大背景下，加速开发利用的一种高热值能源。富含木质纤维素的生物质资源因其储量丰富、可再生等特点而受到广泛关注。利用含水率低、单位体积产能效率高的干式厌氧发酵技术，能够获取高收率的绿氢，从而应对能源危机和实现生物质的无害化处置。

温度会影响微生物群落组成和底物转产H₂效率。超高温（65°C）可以降低粘度，提高传质效率，具有比高温（55°C）和中温（35°C）更高水解速率和H₂产量。然而，很少有关于各种恒温（35、55和65°C）对木质纤维素材料产生H₂的影响的全面研究，尤其是干式厌氧发酵系统中。此外，理论上，从35°C到65°C的梯度加热可以促进纤维素酶和半纤维素酶的活性，抑制产甲烷过程，比恒温下更具产H₂潜力。此外，通过梯度加热条件驯化微生物群落也可能导致更多的水解细菌随着温度的升高而完全保留和高度富集，这将促进水解过程。然而，这一猜测仍有待证实。

本研究使用秸秆作为代表性生物质资源进行产H₂，评估不同恒温（35、55和65°C）和梯度升温（35-65℃）下的产H₂性能。通过结晶度计算、官能团分析和酶活性测定剖析限制产H₂的关键因素。利用宏基因组分析揭示调节产H₂的微生物机制。

- 结果 -

在恒温条件下，与35°C、55°C相比，65°C的COD浓度持续增加，水解性能更高。然而，与65°C相比，35-65°C的COD浓度较低。持续升温导致的水解性能弱于恒温65°C。持续增加的NH₄⁺-N浓度和电导率证实温驱水解性能差异。此外，产酸性能高低顺序为65°C>55°C>35°C。然而，与65°C相比，35-65°C具有同样高的产酸和产乙酸性能，都取得了优异的产酸和产乙酸性能。最终，累积产H₂量的顺序与产酸性能的趋势一致，65°C获得最高产H₂量26.01 mL/g VS，甚至高于35-65°C的13.53 mL/g VS。然而，出乎意料的是，尽管35-65°C产酸过程具有优势，但其水解和H₂生产性能不如恒温65°C。由此可见，水解是限制产H₂的关键因素。

水解、产酸和产H₂直接由酶活调节，65°C较其他恒温具有更高蛋白质水解活性。然而，与65°C相比，35-65°C虽然具有高活性，但是水解性能略低，表明蛋白质水解可能不是决定水解性能的主要因素，而是木质纤维素降解。值得注意的是，AK活性和产乙酸性能的趋势不一致，乙酸的高产率可归因于其高水解性能和超高温引起的高效生化反应过程。此外，Hase活性与产H₂量相反，进一步证实产H₂量可能取决于水解性能。

图1 不同温度条件下厌氧消化性能。

a COD浓度，b NH₄⁺- N浓度，c 电导率，d VFA浓度，e H₂日产量，f H₂积累产量，g 蛋白酶活性，h AK活性，i Hase活性。

秸秆主要成分为木质素、纤维素、半纤维素。恒温条件下，木质素的降解效率与水解性能的趋势一致，即65℃>55℃>35℃。此外，与65°C相比，35-65°C的木质素降解效率也较低。但是纤维素、半纤维素降解率存在差异，不完全符合水解趋势。这表明木质素降解是决定水解性能的主要限制性过程。XRD和FTIR揭示了木质纤维素的降解特征。恒定的65°C促进了木质素的氢键、羧基、醛基、酮基和酯基的解构，从而释放出被木质素包裹的半纤维素和纤维素，进而有效利用。需要注意的是，木质素的降解直接受功能酶的调节，但是水解酶活与水解性能不一致，酶活不是水解性能的主要决定因素，这需要水解细菌进一步解释。

图2 不同温度条件下木质纤维素的降解特性。

a 木质纤维素降解率，b XRD，c FT-IR，d LE活性。

温度变化会影响微生物群落结构，持续升温甚至可以直接驱动微生物群落结构重建。微生物群落结构的变化与木质纤维素的降解速率密切相关。为揭示决定木质纤维素水解的关键机制，重点研究了水解微生物群落的动态变化，基于宏基因组测序在属水平上对水解细菌进行了详细的鉴定。35℃优势菌属为木质素/纤维素降解菌属Pseudomonas（27.00%）。然而，该菌属携带耗H₂基因，抑制H₂积累。55℃富集半纤维素降解菌属Herbinix（25.10%）。该菌属并未携带木质素降解基因，这表明水解性能可能不是主要由木质素降解细菌决定的。Herbinix携带的产H₂基因促进H₂积累。65℃优势菌属为纤维素/半纤维素降解菌属Thermoclostridium（11.89%）。超高温作为环境的选择压力，驱动Firmicutes中的特定细菌富集。木质素降解菌的低丰度进一步证实水解性能可能主要受超高温的调节，而H₂积累主要得益于产H₂菌属Thermoclostridium富集和耗H₂菌属抑制。然而，在35-65℃，半纤维素降解菌属Acetivbrio（18.91%）占据主导。较低的环境选择压力导致非耐热细菌的富集，这是此时水解性能低的主要原因。此外，Acetivibrio携带的耗H₂基因抑制了H₂积累。

图3 不同温度下具有木质纤维素降解基因的细菌，及其携带的参与H₂产生和消耗过程的基因。

为验证木质纤维素水解基因对水解性能和H₂积累的影响，分析了木质素、纤维素和半纤维素降解基因。参与纤维素/半纤维素降解的功能基因主要富集在65℃，其次是55℃和35℃。与65℃相比，和35-65℃也富集了相似纤维素/半纤维素降解的功能基因丰度。然而，参与木质素降解的功能基因组仅富集在35℃中，表明参与木质素降解的功能菌属和基因不是限制木质素水解和H₂积累的主要因素，应该分别是温度和耗/产H₂基因。

为验证H₂消耗/生产基因对H₂积累的影响，计算了每个相关基因的丰度。检测到9个涉及H₂生产和消耗的反应。在65°C时，产H₂基因实现高丰度富集，高于35℃、55℃。此外，尽管在35-65℃条件下，产H₂基因的丰度占主导地位，但耗H₂基因的高度富集（比65℃高约2.81倍）导致实际H₂产量减少。这证实H₂的积累主要受到H₂消耗/生产细菌和相关基因富集的影响。

图4 木质纤维素的降解机理图。

a 木质纤维素降解过程，b 参与木质纤维素降解的基因的丰度。

随着温度增加，次生代谢物的生物合成、鞭毛组装、同源重组、吡啶代谢导致65℃与35℃、55℃存在差异。随着温度的升高，恒温下微生物运动、物质运输和微生物代谢的功能增强。这证实恒定超高温下微生物反应效率增强，可以促进水解、产酸和产H₂。需要注意的是，35-65°C条件下，组氨酸生物合成模块富集也导致微生物功能出现差异。组氨酸生物合成与双组分系统密切相关，并且其双组分系统富集丰度也高于65℃。通过富集双组分系统可以调节微生物对温度的适应性，从而影响了群落结构，这被认为是35-65°C环境选择压力低的原因之一。

温度调节产H₂的机理可以总结如下。产H₂和耗H₂基因之间的非兼容性富集是决定H₂积累的主要因素，而不是木质素降解过程。在65℃条件下，水解性能较高的主要原因在于，强化的微生物运动和代谢促进木质素的降解；纤维素/半纤维素降解菌及相关基因的富集协助水解过程。同时，由于超高温抑制耗H₂细菌和基因，并富集产H₂基因，最终获得最高H₂产量。然而，35-65℃并未获得预期产H₂效果，原因在于，35-65℃条件下物质转运功能富集低；双组分系统的调节导致环境选择压力低，无法富集耐超高温水解细菌，从而导致木质纤维素水解性能低。同时，由于耗H₂细菌和基因没有受到温度限制，H₂积累减少。

图5 不同温度条件下H₂积累调控机制示意图。

a 恒定65℃条件下产H₂量调控，b 梯度升温条件下产H₂量调控。

- 结论 -

温度是决定厌氧生物制氢效率的关键因素之一。本研究以农作物秸秆为干式厌氧发酵原料，评估了不同控温条件下的产氢潜力，发现恒温条件下的绿氢产率显著高于梯度升温。一般而言，梯度升温可能会导致更多的水解细菌在升温时被高度富集，从而促进水解过程；同时，可以促进纤维素酶和半纤维素酶的活性，有利于氢气的生成。而本研究发现微生物代谢活性并没有在升温期间得到强化，双组分系统调节导致环境选择压力降低，最终导致梯度升温条件下产氢率较低。研究结果表明，木质纤维素的水解效率主要取决于产氢和耗氢间的博弈。而通过温度驯化更易加剧氢气的损耗。本研究改变了人们对温度驯化功能菌群的认知，为高效生物制氢和产氢工程菌株挖掘提供了重要的理论依据，也为助力生物质资源高阶能源化、推动能源产业结构优化提供了重要参考

参考文献

Wu, H., Li, A., Zhang, H. et al. Microbial mechanisms for higher hydrogen production in anaerobic digestion at constant temperature versus gradient heating. Microbiome 12, 170 (2024). https://doi.org/10.1186/s40168-024-01908-8

- 作者简介 -

第一作者

西北农林科技大学

吴恒

博士研究生

吴恒，西北农林科技大学博士生，研究方向为污水与固废资源化，在Microbiome、Advanced Science、Chemical Engineering Journal等期刊发表论文多篇。

通讯作者

西北农林科技大学

姚义清

教授、博士生导师

姚义清，陕西省富平县人，西北农林科技大学教授、博士生导师，机电学院副院长、科研院基础研究处副处长。入选国家、陕西省重大人才工程青年计划，从事生物质厌氧发酵研究。农业农村部农村可再生能源开发利用西部科学观测实验站副站长、全国水肥一体化产业联盟副理事长、国家林草局中国林产工业协会生物质能源与材料专委会常务理事、中国环境科学学会减污降碳专委会委员、陕西省首席科普专家、陕西省青科协常务理事等职。发表学术论文50余篇。第1发明人授权专利9件（转让2件）；主/副编专著3部，主编《现代生物质能源与材料》入选科学出版社“十四五”规划教材。第一完成人获陕西高等学校科学技术研究优秀成果奖一等奖、中国产学研合作创新成果奖一等奖、陕西省环境保护科学技术奖一等奖、陕西电源行业自然科学奖等。

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