bulk RNA-Seq (6)数据挖掘的准备

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我们做完了上游的基础分析之后,接下来就是数据挖掘了。我们先准备数据挖掘的三张表。

表达矩阵(gene_exp)

每一行是一个基因,每一列是一个样本,需要对数据进行标准化。
标准化之前的read count 矩阵,用于差异表达分析
标准化之后的TPM/FPKM 矩阵,用于其他分析(PCA分析、聚类分析等等)

样本信息表(sample_info)

每一行是一个样本,每一列是一个表型特征(光照、地上生物量、茎长等等),可以和基因进行关联分析

基因信息表(gene_info)

每一行是一个基因,每一列是该基因的信息(symbol、KO、GO),基因的信息可以通过eggnog-mapper在线网站注释得到。

准备好这三张表之后,我们就可以去画图啦,下期见。

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当然!下面是一个简单的 bulk RNA-seq 教程,帮助您了解如何进行 bulk RNA-seq 实验和分析。 步骤1:实验设计 - 确定您的研究目的和问题。 - 选择适当的生物样本和处理组。 - 设计实验,包括处理组和对照组,并考虑技术重复。 步骤2:样本准备RNA提取 - 从每个样本中收集细胞或组织。 - 使用RNA提取试剂盒从细胞或组织中提取总RNA。 - 在提取过程中,确保避免RNA降解。 步骤3:文库制备 - 使用RNA-seq试剂盒对总RNA进行磷酸化、逆转录和扩增。 - 为了减少批次效应,可以使用技术重复。 步骤4:高通量测序 - 将文库加载到Illumina或其他高通量测序平台上。 - 运行测序,生成原始测序数据。 步骤5:质量控制和数据预处理 - 对原始测序数据进行质量控制,包括去除低质量读取和去除接头序列。 - 使用软件(如FastQC)评估数据质量,并根据需要进行修剪或过滤。 步骤6:基因表达分析 - 将修剪后的测序数据与参考基因组比对。 - 使用软件(如HISAT2或STAR)进行比对,并生成比对文件(如BAM格式)。 - 使用软件(如HTSeq或featureCounts)计算基因表达值。 步骤7:差异表达分析 - 使用统计学方法(如DESeq2或edgeR)来识别在处理组和对照组之间差异表达基因。 - 设置合适的阈值来确定差异表达基因。 - 对差异表达基因进行进一步的功能注释和通路分析。 步骤8:结果解释和验证 - 从差异表达基因列表中选择感兴趣的基因进行验证。 - 使用定量PCR、免疫印迹等技术验证RNA-seq结果。 这只是一个 bulk RNA-seq 教程的概述,每个步骤都还有很多具体细节和方法可以选择。希望这对您有所帮助!如果您有任何进一步的问题,请随时提问。

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