单细胞质控:Singleron CeleScope使用方法

本文介绍了如何从GitHub克隆并安装Celescope软件,通过my_mapfile文件进行RNA-seq分析,以及如何批量执行shell脚本进行质控。重点讲解了创建mapfile和使用多线程批量处理的方法。
摘要由CSDN通过智能技术生成

官方使用手册: https://gitee.com/singleron-rd/celescope/wikis/

一、下载软件

git clone https://gitee.com/singleron-rd/celescope.git
cd celescope
conda create -n celescope
conda activate celescope
conda install --file conda_pkgs.txt --channel conda-forge --channel bioconda --channel r --channel imperial-college-research-computing
#两个镜像选择其中一种一安装
pip install -i https://pypi.douban.com/simple celescope
pip install -i https://pypi.tuna.tsinghua.edu.cn/simple celescope

二、开始分析

1、首先建一个my_mapfile文件,格式如下:

在这里插入图片描述
这是一个tab分割的文件,其中第一列表示fastaq的前缀,这里要注意最多每个前缀只能有两个fastaq文件,不然会报错:无效的fastaq格式,第二列是文件的储存路径,第三列是样本名。

2、快速构建我们需要跑的代码

cd #进入需要储存分析结果的位置
 multi_rna\
  --mapfile /mnt/data3/my_mapfile\#my_mapfile的储存位置
  --chemistry auto\
  --genomeDir /mnt/MusMus/release101 \#参考基因组的位置
  --thread 8\#进程
  --mod shell

这时候会在自己的储存位置生成一个shell文件,进入文件会有许多***.sh***结尾的文件,如下图:
在这里插入图片描述
任意打开其中的一个文件:
在这里插入图片描述
会发现这些就是我们进行质控需要跑的代码

3、实现上面生成的代码

 cd #进入需要储存分析结果的位置

如何实现上述***.sh***文件的代码,当文件只有一两个的时候,可以一个一个bash,但是文件较多时,用bash就显得很麻烦了,此时可以构建循环语句实现。

首先我们需要创建一个name.txt文件,里面包含了所有样本名。(为了快速跑完,可以用tmux多开几个窗口,构建几个name.txt)

 for i in `cat name.txt`
 do
 sh ./shell/$i.sh 2>./log/$i.log.txt
 done

其中2>就是将标准出错重定向到某个特定的地方,以方便我们后续检查有没有出错。

单细胞数据分析质控是在单细胞测序数据分析中的一个重要步骤,用于评估数据的质量和准确性。以下是一些常见的单细胞数据分析质控代码的介绍: 1. 数据预处理: - 数据加载:使用相应的数据加载库(如`Seurat`、`Scanpy`等)加载单细胞数据。 - 数据清洗:去除低质量细胞和低表达基因,可以根据细胞的总表达量、基因数、基因表达水平等指标进行筛选。 2. 细胞质量评估: - 细胞质量指标计算:计算每个细胞的质量指标,如总表达量、基因数、基因表达水平的均值和方差等。 - 细胞质量过滤:根据设定的阈值,过滤掉质量较差的细胞。 3. 基因质量评估: - 基因表达过滤:去除低表达基因和低变异基因,可以根据基因的表达量和变异系数进行筛选。 - 基因批次效应校正:对于多个批次的数据,可以使用批次效应校正方法(如`ComBat`)进行校正,减少批次间的技术差异。 4. 数据规范化: - 基因表达量规范化:对细胞的基因表达量进行规范化,常见的方法有TPM、CPM、FPKM等。 - 批次效应校正:对于存在批次效应的数据,可以使用一些批次校正方法(如`Scran`、`MNN`等)进行校正。 5. 数据可视化: - 细胞质量可视化:绘制细胞质量指标的分布图,如细胞总表达量、基因数的分布图。 - 基因表达可视化:绘制基因表达热图、散点图等,用于展示基因在不同细胞中的表达模式。
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