miRNA 相对表达量检测技术介绍

miRNA 相对表达量检测技术介绍

一、技术概述

miRNA检测是一种检测生物体内miRNA表达情况的技术，包括Northern杂交、微阵点分析、实时定量PCR等。检测miRNA的表达丰度，对疾病的诊断和治疗具有一定的意义。

• 实验目的

本实验采用实时定量PCR法（QPCR)检测miRNA的相对表达量。主要是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。既可检测miRNA前体，又可检测成熟miRNA的表达。

三、实验流程
1、RNA抽提

取200 uL血清样品至1.5ML的EP管中，加入900 uL裂解液MZA，严格按照“miRcute Serum_Plasma miRNA Isolation Kit”说明书步骤进行提取，详见说明书附件。

2、反转录反应

1）按照下列组分配制RT反应液（反应液制备请在冰上进行）。为了保证反应液配制的准确性，减少分装造成的误差，应按照比实际用量稍大的体积配制反应液，最后加入RNA样品。

试剂组分	使用量