③单细胞学习-pbmc的Seurat 流程

目录

1,数据读取

2,线粒体基因查看

3,数据标准化

4,识别高变基因

5,进行数据归一化

6,进行线性降维

7,确定细胞簇

8,UMAP/tSNE降维(保存pbmc_tutorial.rds)

补充:降维复现镜像

9,分析差异基因

10,可视化基因

11,定义细胞类

1,数据读取

Analysis, visualization, and integration of Visium HD spatial datasets with Seurat • Seurat (satijalab.org)

rm(list = ls()) 
library(dplyr)
library(Seurat)
library(patchwork)
# Load the PBMC dataset :注意需要将文件解压后才能读取处理
#解压后包括三个文件barcodes.tsv;genes.tsv ;matrix.mtx
pbmc.data <- Read10X(data.dir = "D:/2024年5月30日pbmc流程/pbmc3k_filtered_gene_bc_matrices")
# #用原始数据(非规范化数据)初始化Seurat对象
pbmc <- CreateSeuratObject(counts = pbmc.data, 
                           project = "pbmc3k", 
                           min.cells = 3, # min.cell:每个feature至少在多少个细胞中表达(feature=gene)
        
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Seurat中,可以使用函数`FindMarkers()`来寻找不同群组之间具有显著差异表达的基因。该函数会返回每个群组中每个基因的平均表达量和表达差异的p值等信息。你可以使用该函数来获取某个基因在不同群组中的表达矩阵。 具体步骤如下: 1. 从Seurat对象中提取每个群组的细胞簇ID,可以使用`Idents()`函数获取。 2. 对于每个群组,使用`FindMarkers()`函数查找具有显著差异表达的基因。在函数调用中,设置参数`test.use = 'roc'`来使用ROC曲线分析结果,设置参数`only.pos = TRUE`来仅寻找表达上调的基因。 3. 对于每个基因,将其在不同群组中的表达水平提取出来,可以使用`DoHeatmap()`函数来进行可视化,或者使用`FetchData()`函数从Seurat对象的`@markers`属性中提取数据。 举个例子,假设你想获取基因"CD8A"在Seurat对象"pbmc"的不同群组中的表达矩阵,代码如下: ``` # 从Seurat对象中提取每个群组ID idents <- Idents(pbmc) groups <- levels(idents) # 查找具有显著差异表达的基因 markers <- lapply(groups, function(group) { FindMarkers(pbmc, ident.1 = group, test.use = 'roc', only.pos = TRUE) }) # 提取基因"CD8A"在各个群组中的表达数据 cd8a_data <- lapply(markers, function(markers) { cd8a_marker <- markers[markers$gene == 'CD8A', ] cd8a_expr <- FetchData(pbmc@markers, vars = cd8a_marker$gene) cd8a_expr }) # 将表达数据合并成矩阵 cd8a_matrix <- do.call(cbind, cd8a_data) colnames(cd8a_matrix) <- groups ``` 这样,你就可以得到基因"CD8A"在不同群组中的表达矩阵`cd8a_matrix`了。

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