ATAC-seq原理及现有技术的比较

本文介绍了染色质可接近性评估技术,包括DNase-seq、ATAC-seq、MNase-seq和NOMe-seq。ATAC-seq因其高效和低细胞需求量而成为研究热点,而NOMe-seq能同时检测DNA可接近性和甲基化状态。随着单细胞测序技术的发展,单细胞水平的染色质可接近性研究也在逐步推进。
摘要由CSDN通过智能技术生成

Chromatin accessibility and the regulatory epigenome Sandy 文献阅读及分析总结

在这里插入图片描述
在开始讲述之前,我们先来了解一下本文中接下来的几种染色质可接近性的技术,主要包括早期的DNase-seq技术,ATAC-seq技术。
首先对于染色质的可接近性的评估
对于染色质的可接近性的评估,通常是通过量化染色质的甲基化状态以及对DNase的敏感性来量化的。DNA超敏感化,于1973年,Hewish和他的同事使用DNA内切酶对染色质进行片段化,显示核小体在整个基因组中具有周期性超敏反应,即在染色体上存在对DNA酶敏感的位点,这些位点证实裸漏在染色体上无组蛋白包裹的DNA。DNA超敏感位点呈现出周期性的规律,即切割后的DNA片段都在100-200bp左右,这也证实了染色体的基本单位核小体的存在。

第一个大规模应用染色体可接近技术的方法是在2006年,当时在一对研究中首次报道了开放染色质的基因组尺度测量,该研究将从天然染色质中分离的DNA酶切片段杂交到覆盖人类基因组1%的平铺微阵列上。这也是最早的DNase-seq技术,研究者们通过短读长测序,即DNase-seq来研究染色质的可接近性。

本文中介绍的第二种技术是ATAC-seq,这种技术,主要是利用超活性的Tn5转座酶,通过在转座酶复合物上连接上测序的barcode,在进一步在转座酶复合物的作用下,在染色质的可接近进区域插入转座酶所需要的序列(带有barcode)。ATAC

PBMC(外周血单个核细胞)scATAC-seq(单细胞ATAC测序)是一种用于分析单个细胞中染色质可及性区域的高通量测序技术。这种技术可以帮助研究人员了解细胞类型特异性的基因表达调控和染色质结构变化,是研究细胞分化、细胞状态转换及疾病模型等的重要工具。 获取PBMC scATAC-seq数据通常包括以下几个步骤: 1. 样本准备:首先需要收集新鲜或冷冻保存的PBMC样本。这些样本可以是健康个体或病人的外周血,经过密度梯度离心等方法分离得到单个核细胞。 2. 单细胞分离:使用流式细胞仪或其他单细胞分选技术,将PBMC进一步分离成单个细胞。这一步骤对于保证后续实验的高质量至关重要。 3. 核处理和标记:将分离得到的单细胞进行裂解,以释放出细胞核,并将细胞核标记上特异性条形码,这样在测序过程中可以区分不同的细胞。 4. ATAC-seq实验:利用ATAC-seq技术对标记后的单个细胞核进行处理,以打开染色质,并通过PCR扩增标记的DNA片段。 5. 库制备和测序:对扩增的DNA片段进行库制备,并在高通量测序平台上进行测序。 6. 数据分析:测序完成后,需要对原始数据进行质量控制、序列比对、峰值调用、条形码解码以及单细胞水平的分析,包括细胞聚类、差异可及性分析等。 在整个过程中,确保样本质量、实验操作的精确性和数据分析的准确性对于获取高质量的PBMC scATAC-seq数据至关重要。
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