ATAC-seq以及相关技术(DNase-seq,MNase-seq,NOMe-seq)的发展

本文总结了染色质开放性分析技术,包括ATAC-seq、DNase-seq和MNase-seq的原理、优缺点。ATAC-seq利用Tn5转座酶探测开放染色质,所需细胞量少但成本高。DNase-seq依赖DNase酶1切割敏感位点,但消化条件难控制。MNase-seq通过MNase消化研究核小体,但需要大量细胞。NOMe-seq作为MNase-seq的补充,结合甲基化信息提供更全面的染色质状态分析。
摘要由CSDN通过智能技术生成

ATAC-seq技术及相关技术的发展

Reveling in the Revealed这篇文章中,对DNase-seq和ATAC-seq还有MNase-seq相关技术原理以及优缺点进行了总结。具体如下:
在这里插入图片描述

首先,向我们了解到的,CHIP-seq即染色质免疫共沉淀质谱技术,它主要通过对已知的蛋白,通常是目的转录因子TF免疫沉淀,抓取与该TF结合的DNA片段,然后再进一步的扩增,找到TF的潜在靶基因。通常这种方法是由很大局限的:

  • 这种方法智能找到潜在的有限的转录因子的靶基因。而不能找到基因组范围内所有被蛋白质保护的区域。

而文章中提到的DNase-seq 主要是利用DNase酶1对基因组上具有DNase敏感型的位置进行切割,即通过酶进行消化,然后对消化后的片段进行扩增,最后对测序出来的数据分析峰值,找到,有蛋白质保护的区域通常是转录因子以及核小体结合的位置。

这种方法的优缺点是
优点

  • 方法较为简单,易于建立实验体系,已应用于多种细胞,并且对其切割误差有较好的了解;
  • 通过测序的结果,间接的推测核小体以及转录因子的结合位点。

缺点:

  • 此种方法很难控制最佳的消化条件,与此同时,对需要处理的细胞的数目要求较多,比较费时费力,通常需要的细胞数目达到几百万个;
  • 由于其对测序所需要的细胞的数目要求较多,因此对一些样本量较少的细胞来说&#
PBMC(外周血单个核细胞)scATAC-seq(单细胞ATAC测序)是一种用于分析单个细胞中染色质可及性区域的高通量测序技术。这种技术可以帮助研究人员了解细胞类型特异性的基因表达调控和染色质结构变化,是研究细胞分化、细胞状态转换及疾病模型等的重要工具。 获取PBMC scATAC-seq数据通常包括以下几个步骤: 1. 样本准备:首先需要收集新鲜或冷冻保存的PBMC样本。这些样本可以是健康个体或病人的外周血,经过密度梯度离心等方法分离得到单个核细胞。 2. 单细胞分离:使用流式细胞仪或其他单细胞分选技术,将PBMC进一步分离成单个细胞。这一步骤对于保证后续实验的高质量至关重要。 3. 核处理和标记:将分离得到的单细胞进行裂解,以释放出细胞核,并将细胞核标记上特异性条形码,这样在测序过程中可以区分不同的细胞。 4. ATAC-seq实验:利用ATAC-seq技术对标记后的单个细胞核进行处理,以打开染色质,并通过PCR扩增标记的DNA片段。 5. 库制备和测序:对扩增的DNA片段进行库制备,并在高通量测序平台上进行测序。 6. 数据分析:测序完成后,需要对原始数据进行质量控制、序列比对、峰值调用、条形码解码以及单细胞水平的分析,包括细胞聚类、差异可及性分析等。 在整个过程中,确保样本质量、实验操作的精确性和数据分析的准确性对于获取高质量的PBMC scATAC-seq数据至关重要。
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