测序名词解释

测序深度和覆盖度是评估基因组测序质量的重要参数,它们影响着数据的可靠性。测序深度是测序碱基总量与基因组大小的比值,覆盖度则反映了序列覆盖基因组的比例。例如,全基因组测序健康人通常要求30X的深度,而肿瘤样本可能需要70-100X。RNA-seq的测序需求则依赖于研究的生物学问题和转录组的复杂性。对于低表达基因,更高的测序深度是必要的。

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测序深度(Sequencing Depth)是指:测序得到的碱基总量(bp)与基因组(转录组或测序目标区域大小)的比值,是评价测序量的指标之一。

测序深度的计算公式为:

测序深度 = (L × N)/ G

L:读段(reads)长度;N:读段数目;G:测序目标区域大小

覆盖度(coverage)是指测序获得的序列占整个基因组的比例。由于基因组中的高GC、重复序列等复杂结构的存在,测序最终拼接组装获得的序列往往无法覆盖所有的区域,这部分未覆盖的区域就称为Gap。值得注意的是,sequencing coverage指的就是depth of sequencing coverage也就是sequencing depth,反映了一个区域平均被多少个reads测到。

举个例子

假设对一段2000 bp(G:测序目标区域大小)的目标序列进行单端测序,得到1000条reads(N:读段数目),每条reads 200bp(L:读段长度),测序后把所有的reads比对到目标区域后,若2000bp的目标区域中有1800bp的位置至少有1个read覆盖到,而剩余的200bp没有任何read覆盖到,

在这里插入图片描述
可见,测序深度与覆盖度是成正相关的。

而不同实验对于测序量的需求,与目标区域的大小、突变类型和疾病

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