光学定位与追踪技术_从显微镜到显纳镜：小于2nm定位精度光学显微镜

2017年，诺贝尔奖获得者Stefan W. Hell在Science上发表了他的又一个突破性技术——2nm定位精度的光学显纳镜(nanoscopy)——MINFLUX(minimal photon flux)¹。随后又有两篇应用性文章分别发表在2018年的PNAS和今年的Nature Method上，文章分别展示了使用MINFLUX技术快速追踪单分子跳跃和纳米级3D超高分辨率以及多色超高分辨率图像。这标志着纳米级分辨率显微镜已经开始正式走入生命科学研究领域。 在2月24日“病毒与超分辨荧光显微镜”(点击阅读)的文章里，我们和大家交流过显微镜的分辨率和超高分辨率显微镜的概念及种类。MINFLUX处于分辨率的什么位置呢？我们可以参考图中橙色向下箭头所覆盖的区域。从图中可以看出其分辨率已经完全进入纳米量级，称之为显纳镜实不为过。

图1 生命体和成像设备分辨率之间的对应关系

下面我们将根据已发表的MINFLUX文章与大家分析一下这项突破性的技术。 首先，我们通过对核孔复合物蛋白和神经元轴突的血影蛋白(spectrin)的成像，给大家展示一下MINFLUX能达到的惊人的分辨率。 图2是MINFLUX对U-2 OS细胞中的核孔复合物蛋白Nup96的成像结果²。其中的每一个亮点都是一个被Alexa Fluor 647染料标记了的蛋白亚基。

图2 MINFLUX对U-2 OS细胞的Nup96核孔复合物的成像结果

使用Alexa Fluor 647标记Nup96–SNA。可以清晰看到组成核孔复合物亚基分布情况。(1)-(3)为图片a中3个单个核孔的放大。每个点显示的定位信息代表通过其荧光标记表示的单个蛋白质亚基。

其他显微镜成像的结果如何呢？请看下图3¹²。该图使用的样品依然研究的是核孔蛋白Nup96。其中，使用最佳状态显微镜能够得到的单分子定位显微镜的最好结果如图m-s所示，它已经是这些图里分辨率最高的了，但与电镜拍照的复合物结果仍然差距很大，只能“显微，而不能显纳”。对比图2中的MINFLUX结果，我们可以看到MINFLUX还能更进一步帮助研究者观察到每一个复合蛋白聚集上实际还有大约2-4个小亚基的结构，这与电镜拍照的纳米级分辨率结果极为一致。对比电镜，MINFLUX可以对活细胞成像。另外其在制样、多色、3D成像等方面的优势也非常明显。因此，我们可以期待这种光学“显纳镜”未来会给我们带来更多突破性的发现。

文章转自“疯狂成像CrazyImaging”