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在RNA_seq数据的定量分析中,都是首先将reads比对到参考基因组,然后再使用定量软件进行定量,比如经典的hisat+stringTie的分析策略,对于单细胞转录组而言,其定量的原理也是一样的,只不过由于引入了UMI
标签的设计,在定量时需要考虑相同UMI
标签来自同一个转录本,直接使用传统的分析软件就不合适了。
官方提供的cell ranger软件不仅提供了数据拆分,也提供了定量等分析内容。
定量的前提都是需要将reads比对到参考基因组上,对于比对而言,第一步都是先对参考基因组建立索引,官网提供了人和小鼠的参考基因组供下载,网址如下
https://support.10xgenomics.com/single-cell-gene-expression/software/downloads/latest
对于其他物种,我们只需要有基因组的fasta文件和转录本的gtf文件,就可以自定义参考基因组,步骤如下
1. 对GTF文件进行过滤
在原始的GTF文件中,会包