【实验技术笔记】基因沉默：siRNA/shRNA

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• 参考：
  【实验技术笔记】利用重组载体做基因过表达（pCDH 载体）
  载体构建实例解析——构建 SETD3-pEGFP-N1（Snapgene 设计引物）
  干货 | 寻觅基因启动子，UCSC&Ensembl来助威！

1. siRNA/shRNA 的 RNAi 操作流程

• siRNA：约 21-25 个核苷酸 的双链 RNA。
  ① RNA 干扰：在细胞内被装配进 RNA 诱导的沉默复合物 RISC，切割 mRNA，促使 mRNA 降解。切割位点是与 siRNA 反义链互补结合的两端。
  ② 作为引物，与目的 DNA 结合，产生大量 siRNA，放大 RNA 干扰的作用。
• 可以把特定的 siRNA 用脂质体或病毒导入细胞，但 siRNA 只能实现瞬时转染，只能作用两三天，之后就会被降解，且 siRNA 的干扰效果不一定能很显著；
• 也可以把 siRNA 的前体 shRNA（短发夹 RNA）导入细胞，shRNA 在细胞内被切割成 siRNA，从而发挥基因沉默作用。