看很多文章都是用samtools mpileup 来提取感兴趣的位置,其实现在使用这个命令时,会提示我们这个命令已经过时了,使用bcftools mpileup 和bcftools call 。
bcftools是附属于samtools的程序,大多数用法是相同的,只是一些参数的变化,可以用 bcftools mpileup来查看具体用法,或者看文档。https://samtools.github.io/bcftools/howtos/variant-calling.html
第一次使用时,-r 后面是1:226249552-226259702 ,总会报错,提示:
[E::faidx_adjust_position] The sequence not found;
#数据库版本弄错
根据samtools view WH.sorted.markdup.BQSR.bam | head -n 10 时发现里面的染色体是chr,所以就加上了chr,如下
bcftools mpileup -r chr1:226249552-226259702 -Ou -f $reference WH.sorted.markdup.BQSR.bam | bcftools call -mv -Oz --ploidy 1 -o H3F3A.vcf.gz
此时运行ok
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