端粒长度检测技术介绍

端粒长度检测技术介绍

一、技术概述

端粒是位于染色体末端的保护性结构，其长度与细胞衰老、疾病发生及个体寿命密切相关。本实验采用SYBR Green染料法结合实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通过特异性引物扩增端粒序列与单拷贝基因，实现端粒长度的相对定量分析。该方法灵敏度高、重复性好，可精确反映样本端粒动态变化。  

• 实验目的

通过提取样本基因组DNA，利用qPCR技术扩增端粒重复序列与单拷贝基因，计算端粒相对长度（T/S比值），为衰老研究、疾病机制探索及生物标志物开发提供关键数据支持。

 

三、实验流程
1、DNA抽提

取约200ul血液样品至1.5mL离心管中，严格按照“TIANamp Genomic DNA Kit”说明书步骤进行提取，详见说明书附件。

最后洗脱的步骤时，加入了50uL洗脱缓冲液TE进行洗脱。

2、定量PCR检测

1）将Mix在4℃下融解，轻柔地上下颠倒混匀并进行短暂离心。

2）冰上配制下表中的反应液

成分	加入量	终浓度
HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox)	5μL	1×
Forward Primer (10μM)	0.2μL	0.2 μM
Reverse Primer (10μM)	0.2μL	0.2 μM
DNA	2uL
RNase Free dH2O	补足至10 uL

3）将反应管进行短暂离心，确保所有反应液在反应孔底部。

4）采用三步法程序进行反应：

循环数	步骤	温度	时间	荧光采集
1	预变性	95℃	5min	No
40	变性	95℃	10s	No
	退火	60℃	30s	Yes
上述反应结束后，从60℃～95℃过程中进行熔解曲线分析

四、技术优势

✅  高特异性：熔解曲线分析确保扩增产物特异性，避免假阳性

✅  高通量：支持多样本并行检测，节省实验时间

✅  数据可靠：采用内参基因校正，确保结果准确性

✅  应用广泛：适用于血液、组织、细胞等多种样本类型

• 适用范围

1️⃣衰老机制研究与抗衰老药物评价

2️⃣ 癌症、心血管疾病等与端粒缩短相关的病理研究

3️⃣ 干细胞功能评估与再生医学应用

4️⃣环境毒理与辐射暴露对端粒影响的监测

5️⃣ 整合基因组学数据，构建端粒动态变化模型

• 代表性实验结果