Seurat-SCTransform与harmony整合学习

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基础介绍

SCTransform与harmony联合代码测试

1)报错解决

2)SCTransform标准化

3)harmony去批次


基础介绍

源于R tips:Seurat之SCTransform方法原理 (qq.com)

Seurat对象在经过SCTransform处理后会增加一个SCT的Assay,里面的scaled.data就是经过scale之后的pearson residual值,这个值是用于后续降维聚类分析使用的。另外默认情况下,SCTransform还会对UMI进行correct并放置到SCT的counts中,这个correct值的log之后就是SCT assay中的data值,这个data值是用于差异表达及可视化使用的,这里的可视化主要是指的表达量可视化如vlnplot、featureplot等。

UMI进行correct的原理也很简单,和sctransform的第三步类似,它会将log_umi的值指定为所有细胞的中位数,也就是说固定了log_umi的值。然后将pearson residual乘以标准差之后再加上这个值即可。

(1)多个SCTransform后的Seurat对象merge之后的结果,只是简单的合并表达数据的

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Seurat是一种流式单细胞转录组分析的强大工具,它可以对细胞进行合并,然后计算marker基因的表达量。 在使用Seurat进行群合并之后,我们首先需要确保合并的群是具有相似转录组的群。这可以通过可视化绘图和一些统计指标来进行评估,例如,使用t-SNE或UMAP将合并后的群与原始群进行比较,以确认它们是否具有相似的细胞类型或分化状态。 一旦群被合并,我们可以使用Seurat提供的内置函数或方法来计算marker基因的表达量。这可以通过比较合并群中细胞的平均基因表达量与其他群进行统计检验来实现。Seurat提供了一些内置函数,例如FindMarkers()和FindAllMarkers(),这些函数可以帮助我们找到合并群中显著差异的marker基因。 使用FindMarkers()函数时,我们需要设置合并群和参考群,该函数将计算差异表达分析,并返回各个基因的平均表达值以及差异表达的统计学显著性。这些结果可以用于识别在合并群和参考群之间的差异表达的marker基因。 除了FindMarkers()函数外,Seurat还提供了其他方法来计算marker基因,例如t-distributed Stochastic Neighbor Embedding (tSNE) 和 Principal Component Analysis (PCA)。这些方法可以用于将合并群与参考群进行比较,进一步评估它们之间的差异。 综上所述,通过Seurat合并群之后,我们可以使用其提供的内置函数和方法来计算marker基因的表达量,从而帮助我们深入了解合并群的细胞类型和状态。
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