细胞工程-3-植物组织与细胞培养的基本原理

植物组织和细胞培养是指将植物的组织和细胞分离之后,在人工控制条件下进行培养,使其生长、增殖或再生成完整的植株的技术。

理论基础是植物细胞的全能性

目录

第一节 植物细胞的全能性

一、细胞全能性和细胞学说

二、植物细胞全能性

三、植物全能性的实现

(一)表达的条件

(二)实现的途径

第二节 植物细胞的分化

一、植物细胞的分化

(一)概念

(二)植物细胞分化的现象

(三)分子遗传学说

二、离体条件下植物细胞的脱分化和再分化

(一)细胞的脱分化与再分化

(二)离体条件下细胞脱分化和再分化

三、愈伤组织的生长和继代

(一)生长特性

(二)愈伤组织的保持和继代

(三)长期培养物形态发生潜力的丧失

四、影响植物细胞脱分化和再分化的因素

(一)培养基

(二)外植体

(三)植物激素对外植体培养的调控作用

(四)培养条件的影响

五、器官发生

(一)器官发生的概念

(二)器官发生的方式

(三)影响器官发生的因素

第三节 植物体细胞胚胎发生与人工种子

一、植物体细胞胚胎的概念

二、植物体细胞胚胎发生途径

(一)植物体细胞胚胎的来源

(二)植物体细胞胚胎发育过程

(三)影响体细胞胚胎发生的因素

三、人工种子技术

(一)人工种子的概念

(二)人工种子的结构及意义

(三)控制胚性细胞同步化的方法


第一节 植物细胞的全能性

一、细胞全能性和细胞学说

细胞全能性学说(cell totipotent theory)在细胞学说的启示下,德国植物生理学家Haberlandt(1902)提出高等植物器官可不断分割,直至分成单个细胞,每个细胞都可以像胚胎细胞一样,经过体外培养成为完整植株

二、植物细胞全能性

1943年,美国White提出细胞具有全能性(totpotent)的学说。认为每个植物细胞都具有该物种全部的遗传物质,在适宜条件下都具有发育成完整植株的能力

1958年,Steward 胡萝卜韧皮部得到完整植株。

植物全能性的两个含义:

  • 每个植物细胞都具有母体的全部遗传特性;
  • 每个细胞都可以在特定条件下发育成为母体一样的植株。

三、植物全能性的实现

(一)表达的条件

两个阶段:脱分化与再分化。

满足的两个条件:

  • 具有较强的全能性的细胞从植物组织抑制性影响下解脱出来,使其处于独立存在发育的离体条件。
  • 赋予离体细胞一定刺激,包括营养物质、植物激素、光周期、温度、酸碱度等。

(二)实现的途径

  • 1.以植物的离体细胞(如根、茎、叶、花、果实、木质部、形成层、韧皮部、中柱鞘)为培养材料,可以诱导形成完整植物体。
  • 2.以植物的性细胞(如小孢子、大孢子)作为培养条件,可以诱导形成完整植物体。
  • 3.用酶解法去除植物细胞的细胞壁,培养裸露的原生质体,可以使原生质体发育成杂种植物。
  • 4.加入促融剂,可以诱导两个不同种的原生质体融合,继续培养可发育成杂种植物。
  • 5.将外源基因通过不同基因载体(Ti质粒或Ri质粒)引入植物细胞,使植物细胞在分子水平上发生修饰,经过离体培养之后可以再生成具有新性状的植物体。

第二节 植物细胞的分化

一、植物细胞的分化

(一)概念

细胞分化(defferentiation)指由发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化出形态结构、生理功能不同的细胞】组织、器官而最终形成完整植株的过程,即由于细胞的分工而导致其结构和功能或发育方式改变的过程。

细胞水平上,细胞分化就是指细胞在形态、结构和功能上发生改变的过程。

全能性概念是理解分化的基础,两方面含义:

  • 细胞变得与先前的状态不同;
  • 细胞变得与相邻细胞不同。

(二)植物细胞分化的现象

(三)分子遗传学说

细胞分化过程受位置效应影响。

植物细胞分化过程中,分生细胞可以通过逐渐液泡化而进行成熟生长。分化程度较低的细胞是薄壁细胞,具有脱分化的潜能和较高的可塑性,在特定的条件下又可产生分化程度高的细胞和组织,如不定芽、表皮细胞及愈伤组织等。一般已分化细胞具各种细胞器,但不同功能的细胞其细胞器的差异很大。分化程度较高的细胞存在不可逆分化如程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)。

细胞分化是多细胞生物个体形态发生的基础,它是由基因决定和调节的。在一个已经分化的成熟细胞中,通常只有5%-10%的基因活化,其他大部分遗传信息无法表达。

基因表达的差异也会导致代谢途径的差异,导致结构的差异。

二、离体条件下植物细胞的脱分化和再分化

(一)细胞的脱分化与再分化

细胞基因活动模式发生可逆变化,细胞脱离原状态而回复到分生状态,这一变化叫做脱分化或去分化(dedifferentiation)。脱分化,产生愈伤组织(callus)。

脱分化细胞在特定条件下诱导,再次开始分化,形成各种组织、器官或胚状体等,即再分化(redeffierentiation)。

(二)离体条件下细胞脱分化和再分化

分为三个时期

1.诱导期

  • 指细胞准备进行分裂的时期。
  • 加速核酸和蛋白质合成,细胞质增多。液泡减小,核增大,球形;核仁明显变大,RNA增多,恢复分裂能力,开始脱分化。

2.分裂期

  • 进入分裂期是脱分化的完成。再分化的开始。
  • 被启动的细胞全面活跃分裂。启动分裂细胞体积变小,旺盛物质合成,恢复到分生组组织状态。细胞分裂快,结构疏松,未器官化,颜色浅而透明。

3.分化期

  • 形成期,出现组织分化,如周皮分化和微管组织分化。
  • 一方面细胞不断分裂增殖,形成大量愈伤组织,另一方面细胞开始再分化。
  • 表面分裂减慢,内部分裂开始,出现瘤状结构外表面。

特点:

  • 第一,脱分化形成的分生细胞再分化形成薄壁细胞。组成愈伤组织中主要细胞类群,在适宜条件可以变为分生细胞。
  • 第二,在薄壁细胞中,长形薄壁细胞出现木质化增厚线条,形成管状分子,管状分子端壁上形成穿孔,首尾相连,形成一纵行排列的导管。

愈伤组织转到分化培养基后,形成器官或体细胞胚。

愈伤组织如果不及时继代培养,就会进入衰退老化期,丧失细胞分裂和形态发生能力,最终褐变死亡。

三、愈伤组织的生长和继代

愈伤组织(callus)指植物受机械、动物或微生物等伤害后,创伤部位细胞脱分化而不断增殖形成松散排列、无特定结构和功能的非器官化组织。

植物愈伤组织一般为淡黄色或白色,也有淡绿色或红色,老化的愈伤组织多转变为黄色或褐(黑)色。

植物器官或组织在进行离体培养时,外植体也能产生愈伤组织。愈伤组织的形成是成熟细胞脱分化的结果,愈伤组织形成后,通过器官或体细胞胚胎发生可实现植株的再生。

(一)生长特性

1.愈伤组织类型

两类:

胚性愈伤组织(embryonic callus,EC)和非胚性愈伤组织(non-embryonic callus

  • 1
    点赞
  • 4
    收藏
    觉得还不错? 一键收藏
  • 0
    评论

“相关推荐”对你有帮助么?

  • 非常没帮助
  • 没帮助
  • 一般
  • 有帮助
  • 非常有帮助
提交
评论
添加红包

请填写红包祝福语或标题

红包个数最小为10个

红包金额最低5元

当前余额3.43前往充值 >
需支付:10.00
成就一亿技术人!
领取后你会自动成为博主和红包主的粉丝 规则
hope_wisdom
发出的红包
实付
使用余额支付
点击重新获取
扫码支付
钱包余额 0

抵扣说明:

1.余额是钱包充值的虚拟货币,按照1:1的比例进行支付金额的抵扣。
2.余额无法直接购买下载,可以购买VIP、付费专栏及课程。

余额充值