宏基因组测序实验分析方法-功能分析基于reads
1 使用ctab法或相应试剂盒提取样本中的总 DNA;
2 DNA样品检测合格后,使用Covaris超声波破碎仪随机打断,再经末端修复、加A尾、加测序接头、纯化、PCR扩增等步骤完成整个文库制备工作;
3 利用 Illumina NovaSeq 高通量测序平台进行宏基因组测序,获得样品中细菌、真菌和病毒等的宏基因组序列;
4 数据质控和去宿主序列:采用KneadData软件对原始数据进行质控(基于Trimmomatic)和去宿主(基于Bowtie2),KneadData前和KneadData后,用FastQC来检测质控合理性和效果。
5 物种注释:使用Kraken2和自建的微生物核酸数据库(筛选NCBI NT核酸数据库和RefSeq全基因组数据库中属于细菌,真菌,古菌,病毒的序列)比对来计算样本中所含有物种的序列数,再用Bracken来对样本中物种的实际丰度进行估计。
6 功能数据库注释:从质控以及去除宿主基因的re