ctab法提取dna流程图_CTAB法提取DNA原理及步骤、制胶、电泳

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CTAB

法提取

DNA

的原理及步骤：

冷冻的植物组织，在低温干燥状态下机械磨碎。通常精提

DNA

，都要加液氮使材料变脆，易于研磨。低温降低了

DNase

的活

性，利用

CTAB

(十六烷基三甲基溴化铵)去污剂溶解细胞膜，使

核蛋白等解聚，使

DNA

游离出来。

CTAB

作为一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，与核酸形成

复合物，可使核酸沉淀出来。通过离心将

CTAB-

核酸复合物语糖类、

蛋白质等分离开来。随后将复合物溶于高盐溶液中，再加乙醇使核

酸沉淀，而

CTAB

溶于乙醇，从而去除

CTAB

。

1.

研磨

2.

加

1000ul

预处理液，

10-15min

，

4000r

，

10min,

弃上清(重复)

预处理液：

Tris-hcl (PH8.0)

提供缓冲环境，防止核酸被破

坏。

EDTA

(螯合二价阳离子)

0.5M

抑制

DNase

活性。

Nacl

5M

提供高盐环境，使

DNA

充分溶解。

β-

巯基乙醇

抗氧化剂，去除酚，糖，能与酚

形成

络合物，也可与糖结合

。

3.

加

800ul2×CTBA(

预热)

，

10ul

β-

巯基乙醇

，

65

℃

水浴

1-2h

。

15min

震

荡

4.

冷至室温，离心

1000r ,10min ,

取上清

750ul

，加

800ul

氯仿

-

异戊醇(

24:1

)

，

抽提

10min

，

1000r

，

15min,

重复

3

次。

氯仿：加速有机相与水相分层，去除核酸溶液中残余酚，抽提蛋白质等杂质。

5.

取上清，加

2

倍体积的无水乙醇，

-20

℃

,1h,

沉淀

DNA.

无水乙醇：

DNA

不溶于酒精，

CTAB

和一些蛋白质可以，低温乙醇可抑制

DNase

活性，降低分子运动，易于

DNA

沉淀。

6.

4

℃

，

1000r,10min,

倒乙醇，收集

DNA.

7. 70

％乙醇洗涤

2

遍，风干(不可太干)

，溶于

40-60ul dd

水。

DNA

在凝胶中涌动时有电荷效应和分子筛效应，

DNA

分子在高于

等电点的

PH

溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于相同数