共聚焦显微镜的使用操作流程

一、使用前准备：

在使用显微镜进行细胞制片观察之前，一系列细致的准备工作是必不可少的。首先，将废液缸从框架内取出，清空并清洗，确保无残留液体干扰后续实验。接着，倒取适量的PBS（磷酸盐缓冲液）以备清洗玻片使用。同时，撕取合适大小的大滤纸和卫生纸，分别用于吸干多余液体和擦拭显微镜镜头。随后，根据实验需求，精心制备好第一张细胞制片，确保细胞分布均匀，无气泡干扰观察。

二、电源开启及调试：

按照严格的操作流程，逐步打开显微镜的电源。启动后，首先将载物台调整至最低位置，此时显示屏应处于黑屏状态，避免光线干扰。随后，将载物台调至最高工作距离，为放置玻片做好准备。接下来，细致调节显微镜镜头，从低倍镜（5倍、10倍）至高倍镜（25倍、50倍、63倍、100倍）逐步进行，确保每一步都清晰成像。在更换镜头时，务必使用酒精棉球擦拭镜头两遍，以去除指纹、灰尘等杂质。登录显微镜控制系统账号后，打开LAX X软件，点击OK等待系统完全开启。在软件界面，选择图像大小为1024*1024像素，刷新频率为200Hz，确保图像清晰流畅。同时，根据所用倍镜调整zoom值（如100倍镜对应zoom为1，63倍镜对应zoom为1.63），以保持图像的真实比例。创建专用文件夹，命名需包含“细胞名称、个人探针名称及浓度、商业探针名称及浓度”，以便后续数据管理和分析。调整通道设置，针对实验需求配置fast live三个选项，确保数据采集的高效性和准确性。

三、找细胞与拍摄：

确定好两个观察通道后，开始精细调整xy轴位置，直至视野中出现目标细胞。随后，通过调节z轴（焦距）来清晰呈现细胞轮廓，初始时调整幅度宜小，逐渐增大直至观察到清晰的荧光场。一旦确认细胞位置及荧光信号，立即停止调整，点击capture picture进行拍摄。拍摄完成后，务必仔细检查并保存图片，确保数据不丢失。实验结束前，将所有图片上传至指定网盘，便于数据备份和共享。

四、关机与整理：

实验结束后，按照规范流程关闭所有激光器，将载物台降至最低位置，避免镜头受损。随后，关闭LAX X软件，登出账号，确保个人信息安全。关闭电脑，选择shut down选项进行正常关机。最后，切断显微镜电源，整理实验台，归还所有试剂和工具至原位，为下一次实验做好准备。