3款简单实用的在线PCR引物设计软件

1. NCBI 的 Primer-Blast

  • 这个工具整合了目前流行的 Primer3 软件,且加上 NCBI 的 Blast 进行引物特异性的验证;可以针对某一特定剪接变异体基因来设计引物。
  • 网址:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/ 或者直接从 Blast 主页(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)上找到。
  • Primer-Blast 的界面包括 4 个部分
    PCR Template(模板区)
    Primer Parameters(引物参数区)
    Exon/intron Selection(外显子内含子设置)
    Specificity check(特异性验证区)
  1. 设计引物,输入目的模板,Accession number / Gi number / FASTA 格式。
    在这里插入图片描述

  2. 验证引物在这里插入图片描述

  3. 外显子内含子:如果设计的引物是跨内含子和外显子的交界处,可在此处设置成为 Primer must span an exon-exon junction。外显子的匹配碱基数和内含子的长度等设置一般选择默认在这里插入图片描述

  4. 特异性(Specificitycheck)选择设计引物或验证引物时的目标数据库物种。ÿ

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引物设计是分子生物学实验中的一项重要工作,它涉及到PCR扩增、基因克隆、基因组重测序等多个实验步骤。在实验中,引物设计需要考虑多个因素,如引物长度、引物的温度、引物的碱基组成等。 Linux系统提供了多种引物设计软件,其中比较常用的是primer3软件。下面我们将详细介绍在Linux系统中使用primer3进行批量引物设计的方法。 首先,需要安装primer3软件。在Linux系统中,可以通过以下命令进行安装: ``` sudo apt-get install primer3 ``` 安装完成后,我们可以使用primer3_core命令进行引物设计。具体命令格式如下: ``` primer3_core < input_file > output_file ``` 其中,input_file为输入文件,output_file为输出文件。下面我们将详细介绍输入文件的格式。 输入文件包括多个引物设计任务,每个任务由以下几行组成: ``` SEQUENCE_ID=task1 SEQUENCE_TEMPLATE=ATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCG PRIMER_TASK=pick_pcr_primers PRIMER_PRODUCT_SIZE_RANGE=100-200 = ``` 其中,SEQUENCE_ID为任务名称,SEQUENCE_TEMPLATE为待扩增序列,PRIMER_TASK为引物类型,PRIMER_PRODUCT_SIZE_RANGE为扩增产物长度范围。每个任务以“=”符号结尾。 下面是一个输入文件的例子: ``` SEQUENCE_ID=task1 SEQUENCE_TEMPLATE=ATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCG PRIMER_TASK=pick_pcr_primers PRIMER_PRODUCT_SIZE_RANGE=100-200 = SEQUENCE_ID=task2 SEQUENCE_TEMPLATE=CGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGAT PRIMER_TASK=pick_pcr_primers PRIMER_PRODUCT_SIZE_RANGE=150-300 = ``` 在输入文件中,可以设置多个任务,每个任务的引物设计结果将输出到输出文件中。 使用以上命令进行引物设计后,输出文件中会包含每个任务的引物设计结果。输出文件的格式如下: ``` PRIMER_LEFT_0_SEQUENCE=ATCGATCGATCGATCGATCG PRIMER_RIGHT_0_SEQUENCE=CGATCGATCGATCGATCGAT PRIMER_LEFT_0=20,5 PRIMER_RIGHT_0=45,5 PRIMER_PAIR_0_PRODUCT_SIZE=150 PRIMER_LEFT_1_SEQUENCE=ATCGATCGATCGATCGATCG PRIMER_RIGHT_1_SEQUENCE=CGATCGATCGATCGATCGA PRIMER_LEFT_1=21,5 PRIMER_RIGHT_1=44,5 PRIMER_PAIR_1_PRODUCT_SIZE=149 ``` 其中,PRIMER_LEFT_0_SEQUENCE和PRIMER_RIGHT_0_SEQUENCE分别为左侧和右侧引物的序列,PRIMER_LEFT_0和PRIMER_RIGHT_0分别为左侧和右侧引物的起始位置和长度,PRIMER_PAIR_0_PRODUCT_SIZE为扩增产物的长度。每个任务的引物设计结果以编号“0”开始。 总结一下,在Linux系统中使用primer3进行批量引物设计的步骤如下: 1. 安装primer3软件。 2. 准备输入文件,设置任务名称、待扩增序列、引物类型和扩增产物长度范围。 3. 使用primer3_core命令进行引物设计,输出结果保存在输出文件中。 4. 解析输出文件,获取每个任务的引物设计结果。 希望这篇文章对你有所帮助!

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