单细胞Seurat的umi矩阵-与feature、counts(用于质控)

目录

关于umi矩阵学习

用umi计算feature、counts值

①meta数据查看

②Count和Feature计算(生成Seurat时自动计算)

1)提取UMI矩阵

2)计算

其他指标

评估质量指标(重点)

1)UMI计数

2)基因计数

3)UMIs vs. genes detected

4)线粒体计数比率

5)综合过滤

过滤提取子集

关于umi矩阵学习

10X数据因为有UMI,不需要考虑基因长度的影响,但仍然需要考虑测序深度在不同细胞之间的差异,所以需要用函数LogNormalize进行处理,具体方法是用该基因的UMI/该细胞的全部UMI,再乘以10000,在按列LogNormalize后,又可以按行进行scale​​,以去除极大值极小值基因对数据的影响。关于单细胞TPM、Count数据的处理_rds文件的umicount和readcount是什么-CSDN博客

用umi计算feature、counts值

scRNA-seq质量控制流程scRNA-seq—质量控制 (qq.com)

①meta数据查看

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Seurat中,可以使用函数`FindMarkers()`来寻找不同群组之间具有显著差异表达的基因。该函数会返回每个群组中每个基因的平均表达量和表达差异的p值等信息。你可以使用该函数来获取某个基因在不同群组中的表达矩阵。 具体步骤如下: 1. 从Seurat对象中提取每个群组的细胞簇ID,可以使用`Idents()`函数获取。 2. 对于每个群组,使用`FindMarkers()`函数查找具有显著差异表达的基因。在函数调用中,设置参数`test.use = 'roc'`来使用ROC曲线分析结果,设置参数`only.pos = TRUE`来仅寻找表达上调的基因。 3. 对于每个基因,将其在不同群组中的表达水平提取出来,可以使用`DoHeatmap()`函数来进行可视化,或者使用`FetchData()`函数从Seurat对象的`@markers`属性中提取数据。 举个例子,假设你想获取基因"CD8A"在Seurat对象"pbmc"的不同群组中的表达矩阵,代码如下: ``` # 从Seurat对象中提取每个群组ID idents <- Idents(pbmc) groups <- levels(idents) # 查找具有显著差异表达的基因 markers <- lapply(groups, function(group) { FindMarkers(pbmc, ident.1 = group, test.use = 'roc', only.pos = TRUE) }) # 提取基因"CD8A"在各个群组中的表达数据 cd8a_data <- lapply(markers, function(markers) { cd8a_marker <- markers[markers$gene == 'CD8A', ] cd8a_expr <- FetchData(pbmc@markers, vars = cd8a_marker$gene) cd8a_expr }) # 将表达数据合并成矩阵 cd8a_matrix <- do.call(cbind, cd8a_data) colnames(cd8a_matrix) <- groups ``` 这样,你就可以得到基因"CD8A"在不同群组中的表达矩阵`cd8a_matrix`了。
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