一键分析10X单细胞数据

对于10X单细胞数据的预处理,我们前面介绍了详细步骤: 

21天精通单细胞数据分析Day03:10X单细胞RNA数据集的预处理

今天我们来介绍一种更为简单的方法:一键处理 10X 下机数据。

流程简介

流程地址:https://usegalaxy.cn > 流程 > scRNA-seq_preprocessing_10X_v3_Bundle (release v0.1)

本流程使用 RNA STARSolo 分析 10X 基因组学的 v3 化学版本数据。从Fastq文件得到与 CellRanger 类似的3个输出文件:barcodes.tsv, genes.tsv 以及 matrix.mtx。

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流程预览

点击小眼睛图标,即可预览流程。可以看到,该流程主要调用 RNA STARSolo 进行数据处理,最后将 log文件和 gene counts 文件交给 MultiQC 进行汇总。

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运行流程

运行流程非常简单,这也是一键分析的含义。只需要设置:

  • • 参考基因组(可以是服务器内置的,也可以是自己上传的)

  • • GTF文件(可以自行上传,或使用平台提供的)

  • • Barcode文件(来自于10X下机数据)

  • • cDNA文件(来自于10X下机数据)

  • • Barcode白名单(来自于10X官网,v3版本的是:3M-february-2018.txt)

  • • Barcode长度是否与Read长度相等(通常情况下,Read中不含 poly-T 时,设置为“是”,否则设置为“否”)

  • • 预期数据数(一个整数,表示预期样本中有多少个细胞)

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设置完毕,点击“运行流程”就可以了。

细心的朋友可能注意到,RNA STARSolo 不需要 10X 下机的 I1(Illumina通道信息)文件。

结果解读

流程会输出 9 个文件,其中3个类似于CellRanger的输出文件:

  • • genes.tsv,基因列表

  • • barcodes.tsv,条码列表

  • • matrix.mtx,定量矩阵

其他文件是:

  • • log 文件,记录RNA STARSolo 运行过程中产生的日志

  • • bam 文件,是Reads比对到参考基因组上的比对文件

  • • summaries 文件,比对情况的摘要文件

  • • 基因的表达量矩阵,每个基因的reads数进行合并后的结果文件,可用于 MultiQC 汇总

  • • MultiQC 使用的原始数据

  • • MultiQC 汇总的网页

注意事项

本流程专用于10X基因组学的 v3 版本下机数据。目前支持输入一个Barcode文件,一个cDNA文件。暂时还不支持多Lane的情况。如果下机数据有多条 Lane,可以直接使用 RNA STARsolo 工具进行分析:

https://usegalaxy.cn > 工具 > RNA STARSolo


云上转录组分析流程(点击图片跳转

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