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摘要
本篇笔记为基迪奥单细胞转录组第一节课程笔记,感觉他们家的课程比之前的同行水平要高一些,并且价格公道,整体课程性价比较高,鼓励大家学习,这里记录一下课程重点。
研究意义
转录组学意义
作为DNA到蛋白质的枢纽(中心法则),其高通量分析的实现性和可解读性较强。
技术比较
普通转录组:数据混沌,样本信息被人为平均化,导致信息缺失
单细胞转录组:标记单细胞,数据以细胞为单位,分辨率提高,可研究时间序列分析;细胞异质性;精微组织及稀有细胞研究。
研究方法
细胞筛选
特异性筛选与非特异性筛选
特异性筛选:显微吸取、显微切割、流式分选
非特异性筛选:微液滴、微流控
文库构建
10X Genomics
测序
实验方法
实验流程
实体组织:去除附着组织,用HBSS清洗组织;将组织剪成2-4mm3的碎块
组织酶解:低速摇床恒温酶解组织;300g离心30秒去除组织碎片;40um滤网过滤剩余组织碎片和细胞团
细胞悬液:DPBS清洗细胞悬液3次;细胞活性和细胞浓度技术后用于单细胞建库。
常见问题
分析内容(重点)
分析内容总览
细胞亚群分类
细胞群体划分:将潜在的同一类型的细胞划分为一个细胞亚群
细胞类型频率统计
Marker基因分析
已知标记基因鉴定细胞类型,图形展示包括而不限于:tSNE/UMAP图,热图,小提琴图,气泡图等
富集分析
分析目的:通过富集分析揭示细胞亚群可能具有的细胞功能
常用方法:超几何检验,GSEA,GSVA
图形展示:柱形图,全图,气泡图,热图
样本差异分析
分析目的:对同一细胞类型进行不同样本之间的差异分析,
以揭示实验处理效应带来的基因变化特征
检验方法:Wilcoxon,MAST,似然比
图形展示:tSNE/UMAP图,热图,小提琴图,气泡图
逆时分析
分析目的:通过单细胞数据推测细胞之间存在的分化关系
常用软件:monocle2,PAGA,Palantir
图形展示:轨迹图,趋势散点图,热图
WGCNA
分析目的:寻找共表达基因,探索与研究目的相关的基因
群体
常用软件:WGCNA
图形展示:热图、网络图
细胞通讯分析
分析目的:通过配受体基因在细胞的表达情况,推测存在
细胞间相互作用的细胞群体以及发生作用的配受体信号
常用软件:cellphoneDB,cellchat,NicheNet
图形展示:气泡图,网络图,热图
转录因子分析
分析目的:从TF和靶基因的表达量推测细胞中可能存在的
基因调控网络
常用软件:SCENIC
图形展示:热图,网络图
总结
第一次课,讲师简单介绍了一下单细胞转录组的整个实验流程,不过对于我而言,只有生信分析这部分内容是比较重要的。之后还会有具体的实操课程,我也会整理笔记发出来,欢迎加微信bbplayer2021进交流群一起学习。