导读
染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)作为研究体内DNA与蛋白质相互作用的金标准,对于基因表达调控研究具有重要意义。但是,实验汪们在操作的过程中总是被虐的体无完肤,糟心的实验结果更是让实验汪们分分钟想去“狗带”,有多虐心就有多少需要注意的地方。好的经验要分享,小编特地总结了高手做ChIP的经验,在此奉上,希望能助大家一臂之力。
在活细胞状态下,使用甲醛将蛋白质-DNA复合物进行固定,并通过超声或酶切将染色质打断为一定范围内的小片段,随后用抗体特异性识别抗原,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,然后对DNA片段进行纯化与检测(如qPCR,基因芯片,高通量测序等)。ChIP广泛应用于检测转录因子与DNA的动态结合,组蛋白各种共价修饰与基因表达的关系。
内源状态下,蛋白质和DNA的结合多数是动态的,因此需要进行固定以捕获特定状态下蛋白和DNA的结合情况,最常用的固定试剂