ChIP-Seq 常见问题解答

关于ChIP-Seq

染色质免疫共沉淀（ChromatinImmunopreciption，ChIP）是研究蛋白质-DNA相互作用的经典实验方法，ChIP 与高通量测序的结合（ChIP-Seq）可以在全基因组范围内对蛋白质结合位点进行高效而准确地筛选与鉴定，广泛应用于组蛋白修饰、转录因子调控等相关领域的研究。

 

 

 

但是在现实中经常会收到咨询ChIP具体实验设计和操作的技术咨询。今天科技君就整理出一些在做ChIP实验中困扰老师和同学们的共性问题，制成以下这篇ChIP-Seq实验“干货帖”。

 

 

1.怎么判断抗体满足ChIP要求？

 

 

 

 

通常每个公司的抗体说明都标有级别（grade），ChIP级。如果没有，通常的规则是ChIP-PCR分析阳性control是阴性control的5倍以上的抗体认为是到达了ChIP级。

 

 

 

2.如果没有商业化的kit怎么办？

 

 

 

表达的表位标记的蛋白也可以。最经常使用的标签包括HA，Flag，Myc和V5。除了表位的抗体，所述靶蛋白也可以标记有生物素受体序列，其可以与生物素经由生物素连接酶在体内或体外进行标记。

 

 

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