qPCR实验中，扩增效率理论上在90%到110%之间，但有时会超过100%。这可能是由于聚合酶抑制，如样品中的抑制物（DNA/RNA、残留物质等）导致Ct值不变，使得扩增效率虚高。避免抑制的有效方法包括样品稀释、纯度检测和选择耐抑制剂的qPCR试剂。
实时荧光定量PCR（qPCR）是一种非常快速、高效、准确的核酸定量分析方法，是分子生物学中大多数领域的首选使用方法。按应用类型来分，qPCR可分为绝对定量和相对定量以及定性分析。但不管绝对定量还是相对定量，确定扩增效率应该是qPCR检测时首先要做的事情 之一。了解扩增效率以及如何计算扩增效率对于准确的数据解释至关重要。
理想情况下，目标序列的分子数量应在每个扩增循环中翻倍，对应于100% 的扩增效率。同样，如果扩增分子的数量少于两倍，这是由于扩增效率低下 - 低于 100%导致。扩增效率较低的最常见原因是不好的引物设计和非最佳试剂浓度或反应条件。另外，二级结构的存在，如二聚体和发夹结构或不适当的退火温度 (Tm) 会影响引物-模板退火，从而导致扩增不良。在确定扩增效率实验时，通常我们会对模板进行系列梯度稀释来做，但在系列梯度稀释过程中，每一次额外的稀释，稀释液的DNA量可能会比预期的量更低，因此连续稀释样品的Ct值之间会出现差异(见下文)。
已知稀释步骤的 Ct 值之间的差异高于预期。10 倍稀释应该相隔 3.3 个循环，但在这种情况下，它们相距更远。
扩增效率计算</
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