荧光定量PCR实验方法设计

qpcr定量的方法

荧光定量实验设计时，定量方法怎么选？相对定量还是绝对定量？相对标准曲线法还是ΔΔCT法？

荧光定量PCR（StarLighter SYBR Green qPCR 预混液（通用型））实验方法要根据试验目的进行设计。一般来说荧光定量PCR要达到的目的有两种：

1 检测样本中某个基因或物种的准确含量，这种方法称为绝对定量法。如一定体积血液中某病毒的含量，或一定水体中某种菌的含量。

2 检测不同样本中某个基因的相对表达情况，这种方法称为相对定量法。如经过不同处理，植物组织中某个基因的表达上调或下调情况。

预实验很重要

在我们展开阐述绝对定量和相对定量的具体实验设计之前，我们先了解荧光定量实验要达到准确定量样本的前提是什么？

准确度高——荧光信号-CT值与目的产物呈标准线性关系；

重复性好——3个及以上重复操作且误差范围小；

动力学范围宽——在较宽的浓度范围内能检测准确。

以上要求，我们都可以通过预实验来进行判断：根据我们上一篇引物设计的介绍，设计出特异性定量引物，使用特异性引物设计预实验：

引物及操作验证

对一个样本的核酸进行连续梯度稀释（推荐5个点的10倍稀释，如果cDNA浓