单端测序(Single-read)和双端测序(Paired-end和Mate-pair)

单端测序(Single-read)

一.流程
(1)将DNA样品片段化处理形成200-500bp片段
(2)引物序列连接到DNA片段一端,然后末端加上接头。
(3)将片段固定在flowcell上生成DNA蔟,上机测序单端读取序列。
在这里插入图片描述

双端测序(Paired-end和Mate-pair)

二.与Paired-end的区别
Paired-end方法是指在构建待测DNA文库时在两端的接头上都加上测序引物结合位点,在第一轮测序完成后,去除第一轮测序的模板链,用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增,以达到第二轮测序所用的模板量,进行第二轮互补链的合成测序(图2)。
在这里插入图片描述
三.Mate-pair文库构建方法
(1)将基因组DNA随机打断到特定大小(2-10kb)
在这里插入图片描述
(2)末端修复、生物素标记、环化
(3)将环化后的DNA分子打断成400-600bp的片段
(4)通过带有链亲和霉素的磁珠把带有生物素标记的片段捕获
(5)捕获片段经过末端修饰和加上特定接头后建成mate-pair文库,然后在上机测序。
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Mate-pair文库制备旨在生成一些短的DNA片段,这些片段包含基因组中较大跨度(2-10 kb)
片段两端的序列。

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单细胞RNA测序single-cell RNA-seq)是一种高分辨率的基因表达分析技术,用于分析单个细胞的转录组。长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类在转录(transcription)过程中产生的,但不编码蛋白质的非编码RNA分子。在过去的几年里,越来越多的研究证明了lncRNA在调控基因表达和细胞功能中的重要作用。 对lncRNA进行单细胞RNA测序分析,可以在单个细胞水平上研究其表达模式和功能。通过这种方法,研究人员可以了解到lncRNA在细胞类型、发育阶段和环境刺激等条件下的表达动态。此外,单细胞RNA测序还可以帮助鉴定和分类未知的lncRNA,发现新的lncRNA功能以及推断lncRNA与其他RNA分子(如miRNA和mRNA)之间的相互作用。 《Single-cell RNA-seq analysis of lncRNAs》这篇文章可能介绍了使用单细胞RNA测序技术来研究lncRNA的分析方法和相关应用。它可能包含了从样本准备到数据分析的流程,介绍了如何将单细胞RNA测序数据与已知的lncRNA数据库进行比对、定量和注释。此外,文章可能提到了一些用于解析lncRNA在单个细胞中的表达模式和功能的计算方法和工具,如聚类分析、差异表达分析和共表达网络分析。 这篇文章的内容有助于加深我们对lncRNA的理解,揭示其在单个细胞水平上的功能和调控机制。这对于我们进一步研究lncRNA在发育、疾病和药物治疗等方面的作用具有重要意义,有望为个性化医学和精准治疗提供新的思路和方法。

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