本文详细介绍了Illumina二代测序的原理，包括DNA文库构建、接头连接、片段筛选、PCR扩增和测序过程。重点讨论了文库的构建方法，如DNA片段化、末端修饰、添加barcode/index以及桥式PCR簇生成。同时，解释了碱基平衡和激光平衡在barcode选择中的重要性，并概述了高通量测序的流程及其优势。
● 参考资料：
- illumina 双端测序
- 二代测序中 barcodes index 的介绍
- illumina 测序原理-百度文库
- illumina 测序原理-丁香园
- DNA 文库构建和 Illumina 测序化学原理
- Illumina mRNA 测序文库构建过程
- 二代测序中 barcodes index 的介绍
- 【陈巍学基因】视频 1：Illumina 测序化学原理
- 二代测序原理（Illumina）-CSDN
- 基因测序的基础，测序原理，一代，二代和三代测序 （有上机操作视频）
- 【快速入门】第一、第二、第三代测序原理（生信笔试面试必考题）
Library Preparation 文库的构建
● 目的：文库需满足捕获 DNA/RNA、cluster、测序、数据分析的过程。
● 文库，就是 DNA 片段的一个集合。将测序片段打断之后就构成了一个 DNA 文库。简单来说就是把 DNA 分子用超声波打断成一定长度范围的小片段。目前除了一些特殊的需求之外，基本都是打断为 300bp-800bp 长的序列片段，并在这些小片段的两端添加上不同的接头，构建出单链 DNA 文库，以备测序之用。
● 文库分类
- DNA 类文库：DNA 小片段文库、DNA 大片段文库、Exon 文库、PCR-Free 文库、简化基因组文库、单细胞样本文库等。
◆ DNA 小片段文库：片段大小在 1Kb 以下的普通 DNA 文库，可用来进行人重测序，动植物、微生物的 de novo 和重测序，16s rRNA 测序，宏基因组测序等项目类型的文库构建。 - RNA 类文库：转录组文库、表达谱 (RNA-Seq)、Small RNA。
- 详见：Illumina 平台测序原理及常见测序文库构建详细版。pptx
DNA 小片段建库流程
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