甲基化
在DNA序列不变,C碱基5号碳上加上甲基。一般情况,甲基化位点下游基因表达量减少。
区分甲基化和非甲基化碱基
亚硫酸氢根:
甲基化C 保持不变;非甲基化C被转化为U。
PCR新合成的DNA链:甲基化C,非甲基化T。
区分羟甲基化和甲基化
高锰酸钾:羟甲基化C — 甲酰化C + 亚硫酸氢根 — U
糖基保护羟甲基化C。
内参
甲基化缺陷型的大肠杆菌或无甲基化的λDNA,目的是探究实验中C的转化效率。
参考基因组处理
- 参考基因组的C改为T,还测序序列比对。
- 参考基因组的G变为A,和测序序列互补链比对。
甲基化的位置
几乎发生在CpG岛(70%启动子在这里)。会损害转录因子结合,稳定沉默基因表达。
发生在基因区间能抑制有害元件的表达。
BS-seq需要学习的软件
Bismark 甲基化比对
methylKit 差异甲基化分析