单细胞专题（1） | 单细胞转录组研究样本准备指南（上）

前言

      单细胞RNA测序（scRNA-seq）是目前最前沿，能进行大规模实验的转录组研究技术，为理解细胞组成和动态生物学过程提供了很多新的见解。单细胞研究已经为我们理解发育过程，老化和疾病（如癌症）等提供了大量数据。在这里，小编主要就前期的样本准备与保存需注意问题给大家进行讲解，以备大家在不同的研究场景和研究背景下，走好单细胞转录组学研究的第一步。

1.细胞样本

细胞准备量：

细胞总量＞5×10^5 cells

采集及运输：

外周血（PBMC）单核细胞

· 通常采用Ficoll密度梯度离心法分离血液中的PBMC细胞。

· 如不能立即进行单细胞测序实验，在提取到状态良好的PBMC后，可选择冻存后寄送。

培养细胞

·悬浮细胞可直接将细胞悬液轻柔吹打混匀；贴壁细胞一般用0.25%的Trypsin-EDTA酶消化解离；脆弱细胞系使用强度稍弱的胶原酶进行处理，有效保证细胞活率。用含 0.05% BSA的PBS（或常规培养基）或含5%的FBS重悬清洗细胞。

· 2-8℃放置，2h内进行单细胞微反应体系的构建。对于需运输或者保存的细胞，可冻存处理。

细胞冻存：

· 将10^6~10^7个细胞，重悬于1mL细胞冻存液中，转移入外螺旋式冻存管，程序降温至-80℃，转移至液氮中长期保存。冻存细胞干冰运输到公司实验室，在3个月内复苏细胞进行后续实验。

· 冻存细胞的规范性对细胞冻存质量影响较大，需严格遵守梯度冻存程序。

2.组织样本

样本采集

1. 新鲜组织：样本量≥200mg（至少黄豆大小）；

2. 穿刺组织：≥2条（长度1.5cm，直径≥1.5mm）；