柱层析Standard Operation Principle

柱层析SOP总流程图：

一、TLC检测：

        尝试极性PE:EA的比值由5:1到1:1，如若TLC薄板上点未发生变化，再继续尝试极性DCM:MeOH由5:1到1:1。需保证各点的Rf分布在0.1到0.9之间。

PE:石油醚    EA：乙酸乙酯        DCM：二氯甲烷      MeOH：甲醇  

二、柱层析的预处理与极性选择：

     1.柱层析的预处理：

        首先，在柱的20cm和22cm处划线，再使用浸泡在PE中的600目硅胶填充至柱的20cm。其次，将拌样后的体系硅胶填充至22cm处。最后，使用梯度洗脱方法，极性从TLC监测稀释十倍的浓度不断洗脱，直到最大极性“TLC的极性*Rf点之间最小距离”。

     2.柱层析的溶剂循环方法：

        完全过掉一个色带之后，配制同样极性的溶剂倒入柱中，来进行清洗，清洗两次，溶剂体积控制在200+-40ml。再将清洗的溶剂倒掉。再将接受瓶中的溶剂循环过柱，直至下一色素带结束洗脱。

三、色谱柱洗脱以及过柱液极性的确定方法： 

           梯度洗脱以200+-40ml溶剂作为洗脱剂，观察洗脱剂的极性大小，如果未达到洗脱剂标准，需不断循环直到极性最合适的溶剂。

            如果洗脱剂的最大极性比稀释十倍还小，则按照最大极性进行洗脱。例如，某反应可以在PE：EA=1：1下各点可以分布在Rf=0.1~0.9的区间内，但是其中两个点的中心距离Rf值为0.05，则洗脱剂的极性大小应该为1：1*0.05=20：1。

四、色素带发生重叠的应急处理办法：

       如果采用如上SOP操作仍然发生体系中色素带重叠或者多点一起冲下，记录此时采用的极性大小以及浓缩采用的溶液体积。继续过柱，以100ml+-20ml的体积过柱并TLC监测，“掐头去尾”得到最纯产品。 对于“掐头去尾”前后不纯的体系上大板分离。

五、没有色素带的分离方法： 

 

         对于没有色素带的柱层析，首先判断是否存在紫外吸收。

        1.存在紫外吸收：

              每200+-40ml过柱液点一下板，如果出现点则立即浓缩并且TLC确认。

        2.不存在紫外吸收：

              如果最大极性比TLC稀释十倍的极性还小，则每次按照最大极性过柱并200+-40ml的体积浓缩并磷钼酸浓缩监测。如果最大极性比TLC稀释十倍的极性大，则每次按照稀释十倍的极性以200+-40ml的体积过柱并磷钼酸浓缩收集。