利用Jaspar进行转录因子结合位点预测

前期我们介绍了如何进行ChIP-qPCR验证,里面提到了一个比较重要的因素——扩增范围的选择及引物的设计。相比双荧光素酶、酵母单杂-点对点验证等允许完整启动子验证的实验,ChIP-qPCR要求单次验证的范围尽量控制在150-200bp内。但一个基因的启动子一般有2-3k,如果漫无目的地选择区域去验证,不仅花费的成本会很高,检测效果也会大打折扣。在没有进行前期ChIP-seq的基础上,如何对感兴趣的转录因子(TF)以及靶基因pro进行验证,以及如何筛选靶点,也成为了许多老师困惑的地方。

前期我们介绍了当拥有motif矩阵时,如何利用fimo进行结合位点预测,详见【一文GET寻找motif在序列上的定位】。这里,给大家介绍一下如何利用Jaspar去寻找感兴趣TF的motif以及利用Jaspar-scan进行结合位点预测。

 一  「 确定目标转录因子名称与靶基因启动子序列 」

要做验证,当然就要确定好验证对象。当验证对象为转录因子时,大多数老师都会将靶基因的验证区域锁定为启动子序列。那么,我们可以通过NCBI(其他数据库也行,在此以NCBI为例)去找到某个靶基因的启动子序列。我们以STAT3(TF)以及CXCL1-pro(靶基因启动子)(物种:human;参考文献:doi:10.1038/s41419-024-06843-y)作为研究对象。核心数据库JASPAR CORE包含的物种类群主要包括vertebrata(脊椎动物),insecta(昆虫),nemat

### 转录因子结合位点预测工具及相关方法 #### 工具介绍 Unibind 是一种专注于人类转录因子结合位点 (TFBS) 预测数据库工具。它利用 ChIP-eat 对 ReMap 数据库中的 chip_seq 数据进行深入分析,并结合 JASPAR 数据库中的人类转录因子信息,通过多种模型(包括 PWM、DNA shape model、TFFM 和 Binding Energy model)精确预测 TFBS[^2]。 另一个重要的工具是 GimmeMotifs,这是一个用于分析和预测 DNA 转录因子结合位点的综合工具包。特别适用于 ChIP-seq 实验的数据处理,能够构建完整的 motif 预测管道。其详细的安装指南和使用实例可以在官方文档中找到[^4]。 此外,在植物研究领域,ChIP-seq 技术被广泛应用以鉴定特定条件下转录因子结合位点。例如,在茄子抗青枯病的研究中,ChIP-Seq 方法成功鉴定了 SmTCP7a 转录因子在整个基因组范围内的结合位点[^3]。 #### 计算机算法与数据分析流程 生物信息学方法在大规模非编码区功能研究中扮演着重要角色。通过对基因组序列数据的高效解析,这些方法能有效筛选潜在的转录调控元件并为后续实验提供依据[^1]。具体来说: 1. **Peak Calling**: 使用 peak calling 算法从芯片序列数据中识别可能的峰区域。 2. **Model Integration**: 将 Peak 区域的结果与不同的预测模型相结合,如位置权重矩阵 (PWM),进一步提高预测准确性。 以下是 Unibind 中使用的部分代码逻辑示例: ```python def predict_tfbs(peak_regions, pwm_model): predicted_sites = [] for region in peak_regions: score = calculate_pwm_score(region.sequence, pwm_model) if score > threshold: predicted_sites.append((region.start, region.end)) return predicted_sites ``` 此函数展示了如何基于预定义的位置权重矩阵评估每个峰值区域内是否存在高可能性的转录因子结合位点。 #### 总结 综上所述,目前主流的转录因子结合位点预测工具有 Unibind 和 GimmeMotifs。前者侧重于整合多源数据实现精准定位;后者则更偏向于定制化的工作流设计支持多样化的科研需求。两者均依赖先进的计算技术和丰富的基础数据库资源共同推动生命科学研究进展。
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