前期我们介绍了如何进行ChIP-qPCR验证,里面提到了一个比较重要的因素——扩增范围的选择及引物的设计。相比双荧光素酶、酵母单杂-点对点验证等允许完整启动子验证的实验,ChIP-qPCR要求单次验证的范围尽量控制在150-200bp内。但一个基因的启动子一般有2-3k,如果漫无目的地选择区域去验证,不仅花费的成本会很高,检测效果也会大打折扣。在没有进行前期ChIP-seq的基础上,如何对感兴趣的转录因子(TF)以及靶基因pro进行验证,以及如何筛选靶点,也成为了许多老师困惑的地方。
前期我们介绍了当拥有motif矩阵时,如何利用fimo进行结合位点预测,详见【一文GET寻找motif在序列上的定位】。这里,给大家介绍一下如何利用Jaspar去寻找感兴趣TF的motif以及利用Jaspar-scan进行结合位点预测。
一 「 确定目标转录因子名称与靶基因启动子序列 」
要做验证,当然就要确定好验证对象。当验证对象为转录因子时,大多数老师都会将靶基因的验证区域锁定为启动子序列。那么,我们可以通过NCBI(其他数据库也行,在此以NCBI为例)去找到某个靶基因的启动子序列。我们以STAT3(TF)以及CXCL1-pro(靶基因启动子)(物种:human;参考文献:doi:10.1038/s41419-024-06843-y)作为研究对象。核心数据库JASPAR CORE包含的物种类群主要包括vertebrata(脊椎动物),insecta(昆虫),nemat

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