细胞亚器文献阅读二~An ER-Mitochondria Tethering Complex Revealed by a Synthetic Biology Screen

细胞亚器文献阅读二~An ER-Mitochondria Tethering Complex Revealed by a Synthetic Biology Screen

通过合成生物学筛选ER和Mito的连接复合体

为了揭示参与线粒体以及ER之间互作的成分，作者通过合成生物学筛选的方法，筛选了能够用来连接这两个细胞亚器的人工合成蛋白作为补充。作者发现了定位在内质网以及线粒体上的四种蛋白Mmm1/Mdm10/Mdm12/Mdm34 ，通过遗传互作的基因组匹配，发现了这些蛋白质参与Ca2+信号以及磷脂合成的生物学过程。在突变的细胞中磷脂的合成受损，这些复合物位于ER和Mito离散接触位点上，由此提示这些ER和Mito的接触位点促进了细胞间的Ca2+的交流和磷脂的交换。

问题发现的过程，首先，作者考虑到，脂质的合成在ER上，与此同时，脂质向其他的细胞器的运输主要是通过囊泡进行运输的，但是，线粒体与这种囊泡运输途径无关，但是作为线粒体内外膜上的重要成分，脂质是如何从合成部位向线粒体上运输的呢?
作者通过电子显微镜观察到，ER和线粒体之间存在相互接触的位点奶奶，并且在分离的细胞组分中，也发现了这些位点的富集，由此作者提出假设，这些位点，可能参与ER和线粒体之间的的脂质的运输。

在这篇文章中的关键技术是，作者设计了一种遗传突变相关的筛选，其主要原理是

Fig. 1. A synthetic biology screen to uncover mutants of the ER-mitochondria connection. (A) Rationale of the screen. (Top) In WT cells a yet unknown endogenous complex tethers the ER to the mitochondria. (Middle) Mutations causing the loss of the endogenous complex are detrimental and cause slow growth or cell death. (Bottom) Artificial ER-mitochondria tethering by ChiMERA can suppress the defects associated with the loss of the endogenous tether. (B)Outline of the ChiMERA. A central GFP molecule (green) is flanked by the mitochondria-directed N-terminal Tom70 presequence and transmembrane sequence (red) and the ER directed C-terminal Ubc6 tail anchor sequence (blue).© Confocal Z-series across a yeast cell expressing the ChiMERA and a mitochondrial marker (mt-dsRed). ChiMERA displays a characteristic ER staining with additional thicker structures (arrowheads), which colocalize with mitochondria and represent sites of artificial
tethering.

首先，图A作者发现，在野生型的细胞中存在一种未知的内源复合体，能够讲内质网以及线粒体连接在一起，发现，在这中复合体发生突变后，图A的中间的图，导致细胞生长缓慢或者细胞死亡，底部是一种讲ER和线粒体通过人工合成的蛋白质复合体连接到一起的方法。图B对嵌合体蛋白结构进行解释，他主要是由三部分组成，1N末端Tom70的前端序列，和跨线粒体膜的序列，2.中间部分是GFP标记的部分，3.C末端的蓝色的Ubc6内质网